二手LC高效液相色譜儀分析中，通過(guò)向流動(dòng)相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值和調(diào)節(jié)流動(dòng)相的溶劑極性強(qiáng)度，可以改善分離的選擇性。
一、向二手LC高效液相色譜儀流動(dòng)相中加入改性劑調(diào)節(jié)pH值：
1、抑制溶質(zhì)離子化：
反相液相色譜中，常向含水流動(dòng)相中加入酸、堿或緩沖溶液，使流動(dòng)相的pH值控制在一定數(shù)值，抑制溶質(zhì)離子化，減少譜帶拖尾，改善峰形，以提高分離選擇性。例如在分析有機(jī)弱酸時(shí)，常向甲醇－水流動(dòng)相中加入1%甲酸（或乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸），抑制溶質(zhì)離子化，以獲得對(duì)稱(chēng)的色譜峰。對(duì)于弱堿性樣品向流動(dòng)相中加入1%三乙胺，也可以達(dá)到同樣的效果。
2、調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度：
反相液相色譜中，當(dāng)被分析物質(zhì)是易離解的有機(jī)物時(shí)，隨流動(dòng)相pH值的增加，鍵合相表面殘存的硅羥基和堿的陰離子的親和能力增強(qiáng)，會(huì)引起峰形拖尾并干擾分離，可在流動(dòng)性中加入0.1%～1%的乙酸鹽、硫酸鹽或硼酸鹽。因?yàn)辂}效應(yīng)會(huì)減弱殘存硅羥基的干擾作用，可抑制峰形拖尾并改善分離效果。但經(jīng)常使用磷酸鹽或鹵化物，會(huì)造成硅烷化固定相的降解。
通常調(diào)節(jié)pH值對(duì)中性化合物的影響不大，但對(duì)帶有離子化基團(tuán)的化合物（如氨基、羧基和羥基等）保留因子影響可達(dá)10～30倍，分離度變化明顯。但如果使用的流動(dòng)相中加入了緩沖鹽，最好在使用前用純水過(guò)渡。如果緩沖鹽或離子對(duì)試劑濃度較低，需要較長(zhǎng)時(shí)間平衡。  
二、調(diào)節(jié)二手LC高效液相色譜儀流動(dòng)相的溶劑極性強(qiáng)度：
1、由強(qiáng)到弱：
一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn)，可很快得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例。
2、三倍規(guī)則：
每減少10%的有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規(guī)則。調(diào)整時(shí)注意觀察各個(gè)峰的分離情況。
3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：
當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí)，應(yīng)將有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。