二手液相二手高效液相色譜法的固定相、流動相的要求和特點

二手液相二手高效液相色譜法 的固定相要求

要求：顆粒細且均勻、傳質(zhì)快、機械強度高、耐高壓，化學穩(wěn)定性好

液固：全多空硅膠、高庚子多空微球

二手液相二手高效液相色譜法 的流動相要求

要求：化學穩(wěn)定性好；適宜溶解度；與檢測器相適應；純度高；粘度低。

使用前經(jīng)微孔濾膜過濾，除去固體顆粒，還要脫氣處理。
         

二手液相二手高效液相色譜法 的固定相

常用化學鍵和相的種類
非極性鍵合相：十八烷基硅烷（ODS）最常用。一般用于反相色譜。長鏈k大，載樣量高，穩(wěn)定性好。短鏈分離速度快，色譜峰對稱性好，苯基鍵合與短鏈相似。
弱極性鍵合相：醚基和二羥基鍵合相，應用較少。
極性鍵合相：氨基、氰基，一般用于正相色譜。氰基分離選擇性類似于硅膠，對雙鍵有選擇性，對雙鍵異構(gòu)體，或含雙鍵數(shù)不同的環(huán)狀化合物有較好分離能力。一些硅膠上不能分離的極性強的化合物也可在氰基上分離。氨基鍵合相與酸性硅膠有不同性能，氨基可與糖分子羥基選擇性作用，從而分離糖。在酸性介質(zhì)中還是弱陰離子交換劑，能分離核苷酸。與羰基反應。   鍵合相的性質(zhì)和特點
鍵合反應：主要是硅氧烷型鍵合相，以氯硅烷與硅膠進行硅烷化反應而制的。
含碳量和覆蓋度：鍵合相表面基團的鍵合量可以對鍵合硅膠進行元素分析，用含碳的百分數(shù)表示。覆蓋度參加反應的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。在鍵合反應后用三甲基氯硅烷進行鈍化處理，即封尾，減少對極性組分的吸附。
鍵合相特點：化學穩(wěn)定性好，壽命長；均一性和重現(xiàn)性好；柱效高，選擇性好；適于梯度洗脫；載樣量大。   其他種類固定相

鍵合型離子交換劑：常用陽離子型鍵合相是強蘇醒磺酸類；常用陰離子型鍵合相是季銨鹽類；還有弱酸（堿）型離子交換劑。
手性固定相（CSP）：蛋白類、多糖類、環(huán)糊精、π-氫鍵型（刷型）、大環(huán)抗生素類、配體交換、其他。載樣量小，穩(wěn)定性差且價格昂貴。
親和色譜固定相：配基和載體間有一適當長度間隔臂。

二手液相二手高效液相色譜法 的流動相

流動相對分離的影響

分離方程式：R=\frac{\sqrt{n}}{4}\cdot\frac{\alpha-1}{\alpha}\cdot\frac{k_2}{1+k_2}

選擇合適的溶劑強度使組分k在最佳范圍內(nèi)，選擇合適種類的溶劑改善選擇性使α增大獲得良好分離度R>1.5

溶劑極性和強度

在化學鍵和色譜中溶劑洗脫能力即溶劑強度直接與它的極性相關(guān)。

溶劑極性用溶劑極性參數(shù)表示P^\prime，用以表示正相色譜中洗脫能力

反相鍵合相色譜溶劑強度用另一強度因子S表示

混合溶劑可以用P或S的加權(quán)平均表示