液相色譜儀是屬于易學難用的儀器，比較講究“正確使用”和經(jīng)驗。液相工作者接觸最多的是流動相，流動相是造成液相色譜各種問題的關鍵源頭。液相色譜儀常見的故障一是堵，二是漏。“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。

注：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18 為例，液相色譜儀引起堵的原因如下：

     原因一：配制流動相時細菌污染

首先我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。+U&&新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。

推薦兩種解決方法：

　?。?） 理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。

　?。?） 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。細節(jié)是：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到后面有一個過濾的步驟。從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。

因為：

（1） 流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動相影響更大。

（2） 流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000 多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本。

（3） 流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

（4） 在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。

　　原因二：使用流動相時的細菌污染

　　指的是：流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細菌污染。主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。

舉最簡單的例子：50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式。

一種方式是在上機前就配好混合在一起；

另一種方式是在流路A 放純甲醇，流路B 放純水。

從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性極好的實驗效果。它有一個致命的缺陷就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，建議用10％的甲醇水代替純水溶液（不同比例甲醇水的細菌總數(shù)實驗：在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全殺菌了），這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。

     原因三：不適當操作

　　1） 在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

　　2） 樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

　　3） 在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。

　　4） 在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，的確有發(fā)生過。

　　查堵的方法：在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數(shù)情況下，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數(shù)值，如果某一個部件（柱子除外）裝上和拆下時的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。