寡核苷酸的分析與分離

合成寡核苷酸和DNA片段被應(yīng)用于迅速發(fā)展的應(yīng)用領(lǐng)域，包括作為主體或雜交探針用于治療性制劑。沃特世寡核苷酸分離技術(shù)(OST：Oligonucleotide Separation Technology)基于BEH雜化顆粒的反相色譜柱，以及Gen-Pak離子交換柱，應(yīng)對各種高分辨分析與實(shí)驗(yàn)室規(guī)模分離挑戰(zhàn)所需，包括涉及各種DNA和RNA品種。

寡核苷酸分析柱 — 異乎尋常的高分辨率

沃特世寡核苷酸色譜柱裝有鍵合了C18的第二代雜化技術(shù)BEH顆粒。對去三苯甲基(detritylated，或稱脫保護(hù))的合成寡核苷酸樣品的分離，基于成熟的離子對反相色譜法。

沃特世提供1.7 μm UPLC顆?；?.5 μm HPLC顆粒，裝填以各種不同色譜柱規(guī)格，從而靈活滿足各種實(shí)驗(yàn)室規(guī)模分離或分析的不同需求，并能實(shí)現(xiàn)異乎尋常的樣品分辨率和卓越的色譜柱使用壽命。此外，沃特世的制造和質(zhì)控測試程序，有助于確保批次之間與柱之間的性能的一致性，而無論應(yīng)用的難度有多高。

分離效率相當(dāng)于或優(yōu)于PAGE、CGE、或離子交換HPLC方法
可從去三苯甲基(脫保護(hù))的全長產(chǎn)物中分辨出失敗序列
可放大的柱規(guī)格，滿足實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的分離需求
超長的色譜柱使用壽命，降低單次分析或分離成本
經(jīng)MassPREP OST標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控測試，幫助確保性能穩(wěn)定

杰出的色譜柱壽命
在這些苛刻的分離條件下，填充以BEH技術(shù)顆粒的沃特世寡核苷酸色譜柱顯示出引人注目的柱壽命，同時(shí)還具有并保持卓越的分離性能。而在相同的苛刻分離條件下，傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)色譜柱的使用壽命顯著縮短。

干擾RNA寡核苷酸的UPLC/MS分析

RNA干擾(RNAi)機(jī)制的發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在被廣泛用于靜默目標(biāo)基因表達(dá)，這推動(dòng)了對小分子干擾RNA(siRNA)分析的需求。為滿足對20-25個(gè)核苷酸的小分子干擾RNA(siRNA)進(jìn)行耐用的、快速的、靈敏的分析的需求，沃特世開發(fā)了一個(gè)UPLC/MS方法，運(yùn)用了UPLC OST色譜柱和Synapt HDMS
質(zhì)譜儀。
采集準(zhǔn)確質(zhì)量可對5’-截?cái)喙丫垠w(寡核苷酸合成過程所產(chǎn)生的失敗序列)以及其它一些雜質(zhì)峰進(jìn)行分配。質(zhì)譜圖中的質(zhì)量的每個(gè)峰均使用MaxEnt 1軟件進(jìn)行去卷積化。圖2給出了推測性的5’-端失敗產(chǎn)物。對寡核苷酸母體的幾乎完整序列均進(jìn)行了解釋。質(zhì)譜分析還顯示除了目標(biāo)21-mer RNAi序列以外，還存在一個(gè)額外的尿苷單核苷酸。