日常工作中, 液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要, 如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中, 儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液, 每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機(jī)鹽析出或沉積； 樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì), 完全溶解, 盡量減少對色譜柱的污染, 以延長色譜柱的使用壽命, 同時避免注射過濃的樣品溶液, 以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞； 色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
總結(jié)極易發(fā)生的九種液相色譜儀出峰的異常問題和解決方法如下：
| 極易發(fā)生的九種液相色譜儀出峰的異常問題、解決方法 |
| 序號 |
發(fā)生情況 |
產(chǎn)生的原因 |
解 決 方 法 |
| 1 |
保留時間變化 |
1.柱溫變化 |
柱恒溫 |
| 2.等度與梯度間未能充分平衡 |
至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 |
| 3.緩沖液容量不夠 |
用>25mmol/L的緩沖液 |
| 4.柱污染 |
每天沖洗柱 |
| 5.柱內(nèi)條件變化 |
穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動相 |
| 6.柱快達(dá)到壽命 |
采用保護(hù)柱 |
| 2 |
保留時間縮短 |
1.流速增加 |
檢查泵,重新設(shè)定流速 |
| 2.樣品超載 |
降低樣品量 |
| 3.鍵合相流失 |
流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向 |
| 4.流動相組成變化 |
防止流動相蒸發(fā)或沉淀 |
| 5.溫度增加 |
柱恒溫 |
| 3 |
保留時間延長 |
1.流速下降 |
管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡 |
| 2.硅膠柱上活性點變化 |
用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱 |
| 3.鍵合相流失 |
流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向 |
| 4.流動相組成變化 |
防止流動相蒸發(fā)或沉淀 |
| 5.溫度降低 |
柱恒溫 |
| 4 |
出現(xiàn)肩峰或分叉 |
1.樣品體積過大 |
用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% |
| 2.樣品溶劑過強 |
采用較弱的樣品溶劑 |
| 3.柱塌陷或形成短路通道 |
更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 |
| 4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 |
更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 |
| 5.進(jìn)樣器損壞 |
更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 |
| 6.色譜柱被污染 |
先用純水反向沖洗柱子, 然后換成甲醇沖洗, 接著用甲醇、異丙醇)沖洗柱子 |
| 7.柱頭填料塌陷 |
柱頭用甲醇沖洗干凈, 擦凈柱外壁的填料, 擰緊柱頭 |
| 5 |
鬼峰 |
1.進(jìn)樣閥殘余峰 |
每次用后用強溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗 |
| 2.樣品中未知物 |
處理樣品 |
| 3.柱未平衡 |
重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜) |
| 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) |
每天新配,用抗氧化劑 |
| 5.水污染(反相) |
通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水 |
| 6 |
基線噪聲 |
1.氣泡(尖銳峰) |
流動相脫氣,加柱后背壓 |
| 2.污染(隨機(jī)噪聲) |
清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑 |
| 3.檢測器燈連續(xù)噪聲 |
更換氘燈 |
| 4.電干擾(偶然噪聲) |
采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等) |
| 5.檢測器中有氣泡 |
流動相脫氣,加柱后背壓 |
| 7 |
峰拖尾或出現(xiàn)雙峰 |
1.柱超載 |
降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 |
| 2.峰干擾 |
清潔樣品,調(diào)整流動相，使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子 |
| 3.硅羥基作用 加三乙胺 |
用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品 |
| 4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 |
更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 |
| 5.柱塌陷或形成短路通道 |
更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 |
| 6.死體積或柱外體積過大 |
連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 |
| 7.柱效下降 |
用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱 |
| 8.篩板堵塞或柱失效 |
反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子 |
| 8 |
峰展寬 |
1.進(jìn)樣體積過大 |
用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% |
| 2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 |
進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 |
| 3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 |
設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點 |
| 4.檢測器時間常數(shù)過大 |
設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% |
| 5.流動相粘度過高 |
增加柱溫,采用低粘度流動相 |
| 6.檢測池體積過大 |
用小體積池,卸下熱交換器 |
| 7.保留時間過長 |
等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫 |
| 8.柱外體積過大 |
將連接管徑和連接管長度降至最小 |
| 9.樣品過載 |
進(jìn)小濃度小體積樣品 |
| 9 |
峰面積重復(fù)性不佳 |
1.進(jìn)樣閥漏液 |
更換進(jìn)樣閥墊圈 |
| 2.加樣針不到位 |
保證加樣針插到底,準(zhǔn)確注射樣品溶液 |
400-800-3875 
